На картинке А вы видите коробочку, в которой энтот кит приехал. Клинический вариант мне дать пожмотились - он намного дороже, мне выдали упрощенную версию "для исследований".
Итак, берем "жидкость человеческого тела" - мазок из носа или из горла, я и моя лаборантка просто плюнули в пробирку, в самом буквальном смысле этого слова. Следующий этап - выделить из этой неаппетитной жидкости генетический материал вируса, в нашем случае - РНК. Анализировать РНК довольно сложно, поэтому мы быстренько переписываем эту информацию в ДНК (см. картинку В). Вот теперь можно работать. В коробочке с картинки А лежат молекулярные метки (картинка С, сиреневая полоска) и праймеры (красная и оранжевая полоски). Эти метки и праймеры безошибочно опознают генетический материал именно этого вируса. Чтобы сконструировать такие метки, нужно прочесть геном нового вируса и сравнить его с геномами других вирусов. Метки должны узнавать только нашу корону-19, а не все остальные короны, которых в мире очень много и они все очень похожи. Лет 20 назад составление таких меток было искусством, которым владели не все, сейчас это может сделать каждый студент, которого научили пользоваться соответствующим софтом. Но метки для диагностики проверяются не только на компьютере, но и в пробирках - чтобы точно не получить ложно-позитивный результат, если человек является носителем какого-то далекого безобидного родственника нашей короны. В моем ките обнаружились три метки для трех различных участков 2019-nCoV - чтоб уж наверняка.
Следующий этап - Real Time PCR (RT-PCR), как оно работает? Праймеры и метки при определенных условиях "садятся" на ДНК вируса: праймеры по бокам, а метка посредине. Приходит DNA-polymerase (что это такое сейчас не важно) и как бегунок бежит от одного праймера к другому (коллеги, не бейте ногами). Если вы внимательно смотрели, на метку нацеплены два шарика - зеленый и синий, как у Пятачка. Зеленый - светится на определенной длинне волны, а синий этот свет глушит. Когда они находятся рядом, никто не светится. Вышеуказанный бегунок добирается до метки и начинает ее пережевывать, таким образом синий и зеленый шарики больше не связаны, растояние начинает увеличиваться, и зеленый начинает светиться. Этот свет улавливается детектором - чем больше таких меток высвободилось за один цикл - тем сильнее светится. В конце концов мы получаем графики типа того, который мы видин на картинке D.
На графике видно, что в начале реакции есть какое-то фоновое свечение, а потом кривые резко уходят ввысь. Чем раньше кривая преодолела фоновый порог, тем больше вируса было в изначальной жидкости. При этом желательно молиться чтобы в пробирках, куда налили только воду и не клали вирусы, кривая оставалась ниже фонового порога, иначе все плохо и начинай все с начала.
Весь процесс при наличии хорошо обученного персонала и откалиброванной аппаратуры, занимает несколько часов. Если получен позитивный результат, то его перепроверяют, если он все еще позитивный - значит мы имеем носителя вируса. Если результат отрицательный , то у нас два варианта: 1) человек здоров; или 2) человек еще не вырастил достаточного количества вирусов чтобы мы могли их увидеть. Порог чувствительности в искуственных условиях (т.е. взяли чистый синтетический РНК вируса и произвели с ним все эти манипуляции) - 3-4 вируса на реакцию. Каков порог в полевых условиях мы пока не знаем - на это нужно время.
https://www.facebook.com/groups/iznakurnozh/permalink/2918044591586377/
